關(guān)鍵詞：非實質(zhì)細胞；猴肝星狀細胞；猴庫普弗細胞；猴肝竇內(nèi)皮細胞；猴肝內(nèi)膽管上皮細胞；猴免疫細胞；原代肝細胞；猴原代肝細胞；肝靶點；肝遞送；Non-Parenchymal Cells, NPCs；Monkey Hepatic stellate cells，HSCs; Monkey Kupffer cells, KCs; ;Monkey Liver Sinusoidal Endothelial Cells, LSECs; Monkey Intrahepatic biliary epithelial cells,IBEpiCs;Monkey Immune cells; Primary hepatocytes；Primary Cynomolgus Monkey Hepcotytes,PCH; Liver-Targeted；Liver Delivery

肝臟（Liver）是藥物代謝的重要器官，體外代謝模型多以肝臟為基礎(chǔ)。其中，原代肝細胞（Primary hepatocytes）作為一種肝臟體外模型，因具有較好的體外試驗重現(xiàn)性，基本維持了肝臟的代謝功能，特別是較好的保留了與體內(nèi)一致的酶水平，成為了體外藥物試驗的“金標(biāo)準"，廣泛應(yīng)用于藥物代謝與毒理學(xué)等研究中。通常，我們所說的原代肝細胞（Primary Hepatocytes）即指的是肝實質(zhì)細胞，占據(jù)肝臟總體積的60%，而剩余的40%則由非實質(zhì)細胞（Non-Parenchymal Cells, NPCs）組成，主要包括肝星狀細胞（Hepatic Stellate Cells, HSCs）、庫普弗細胞（Kupffer Cells，KCs）、?肝竇內(nèi)皮細胞（Liver Sinusoidal Endothelial Cells, LSECs）、肝內(nèi)膽管上皮細胞（Intrahepatic biliary epithelial cells,IBEpiCs)和部分免疫細胞（Immune cells）。這些非實質(zhì)細胞（Non-Parenchymal Cells, NPCs）肝臟結(jié)構(gòu)、功能、免疫調(diào)節(jié)以及疾病發(fā)展中起著重要作用。

此外，合適的模型對于藥物非臨床體外代謝研究而言更是錦上添花！其中，猴作為非人靈長類動物，其遺傳背景、生理結(jié)構(gòu)和代謝途徑與人類高度相似，這使得其原代細胞成為預(yù)測人類藥物反應(yīng)的"黃金標(biāo)準"。因此，IPHASE作為體外研究生物試劑引-領(lǐng)者，現(xiàn)已有猴肝星狀細胞(Monkey Hepatic stellate cells，HSCs)、猴庫普弗細胞（Monkey Kupffer cells，KCs）、猴肝免疫細胞（Monkey Liver Immune cells），包含猴T細胞、猴B細胞和猴NK細胞等產(chǎn)品，并正同步研發(fā)猴肝竇內(nèi)皮細胞（Monkey Liver Sinusoidal Endothelial Cells）和猴肝內(nèi)膽管上皮細胞（Monkey Liver Sinusoidal Endothelial Cells, LSECs），請大家持續(xù)關(guān)注。

圖片來源：網(wǎng)絡(luò)

01    猴肝星狀細胞 Monkey Hepatic Stellate Cells, HSCs

肝星狀細胞（Hepatic Stellate Cells, HSCs），位于肝臟竇周隙（Disse間隙） 中，即存在于肝細胞與肝血竇內(nèi)皮細胞之間的狹小空間，屬于肝非實質(zhì)細胞的一種，約占30%左右。在正常狀態(tài)下，HSCs形態(tài)不規(guī)則，有多個長的樹突狀突起，部分突起包繞肝血（類似于周細胞），且其最-顯著的特征之一是其胞質(zhì)內(nèi)含有大量富含維生素A（視黃醇）的脂滴。

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正常情況下HSCs表現(xiàn)為富含VitA脂滴的靜止型，其主要功能和特征如下：

· 代謝和貯存VitA 肝臟儲存有體內(nèi)80%左右的維生素A，對體內(nèi)維生素A的代謝起著重要作用。視黃醛在小腸內(nèi)酯化后被運輸?shù)礁闻K并與特異的視黃醛結(jié)合蛋白結(jié)合，然后轉(zhuǎn)運到鄰近的HSC儲存。

· 儲存脂肪 正常HSC胞質(zhì)內(nèi)的脂滴含有大量的甘油三酯，為肝細胞提供能源。

· 合成和分泌膠原及糖蛋白、蛋白多糖等基質(zhì)成分 HSC是正常及纖維化肝臟中細胞外基質(zhì)（Extracellular matrix，ECM）的主要合成細胞。HSC還能合成纖維連接蛋白、層連蛋白和粗纖維調(diào)理素等糖蛋白成分，以及硫酸皮素、硫酸軟骨素和透明質(zhì)酸等蛋白多糖。

· 合成基質(zhì)金屬蛋白酶及其組織抑制劑正常情況下，HSC能分泌多種膠原酶和基質(zhì)降解蛋白酶如基質(zhì)金屬蛋白酶（matrixmetalloproteinase，MMP）-1、MMP-2等以降解各種細胞外基質(zhì),同時分泌組織金屬蛋白酶抑制劑（tissueinhibitorofmetalloproteinase，TIMP-1）防止膠原過度降解,使肝臟ECM的合成和分解處在一個動態(tài)平衡中。

· 表達細胞因子及受體正常情況下，HSC可以分泌肝細胞生長因子（HGF），參與肝細胞再生的調(diào)控。此外，HSC還能表達少量的轉(zhuǎn)化生長因子（transforminggrowthfactor-β，TGF-β）、血小板衍生的生長因子（Plateletderivedgrowthfactor，PDGF）和胰島素樣生長因子（IGF）等，同時HSC能表達TGF-β1的II、III型受體和PDGF受體的α亞單位等。

· 參與肝竇血流調(diào)節(jié)HSC伸出胞突包繞著肝竇，通過其纖長突起的收縮功能調(diào)節(jié)肝竇內(nèi)微循環(huán)，從而影響著肝臟的血流分布和門靜脈壓力。

然而，當(dāng)肝臟受到炎癥或機械刺激等損傷時，肝星狀細胞被激活，其表型由靜止型轉(zhuǎn)變?yōu)榧せ钚?，是形成肝肌成纖維細胞和引發(fā)多種疾病的關(guān)鍵。深入了解肝星狀細胞的生物學(xué)特性和調(diào)控機制，對于預(yù)防和治療肝纖維化、肝硬化及其相關(guān)并發(fā)癥（如門靜脈高壓、肝癌）具有極其重要的意義，且在近年來，HSCs因其獨特的生物學(xué)特性正逐漸成為肝靶向（Liver-Targeted）和肝遞送（Liver Delivery）研究的熱點。

02    猴庫普弗細胞 Monkey Kupffer cells，KCs

Kupffer細胞（Kupffer Cells, KCs），即庫普弗細胞或枯否細胞，也稱肝臟巨噬細胞（Hepatic Macrophages），是位于肝臟中的特殊巨噬細胞，是單核吞噬細胞系統(tǒng)的一部分，約占機體巨噬細胞總數(shù)的80-90%。Kupffer細胞定居于肝血竇中，與血管內(nèi)皮細胞相毗鄰，在肝小葉間靜脈周圍常見。

Kupffer細胞具有吞噬、分泌功能、免疫調(diào)節(jié)與監(jiān)視作用。生理條件下，Kupffer細胞不僅能非特異地吞噬和清除血流中的細菌、病毒、內(nèi)毒素和衰老紅細胞等物質(zhì)，而且還具有特異性的免疫應(yīng)答、抗腫瘤免疫、內(nèi)毒素解毒、抗感染、調(diào)節(jié)微循環(huán)及物質(zhì)代謝等方面的作用。Kupffer細胞可分泌多種細胞因子（如白細胞介素、腫瘤壞死因子），參與激活或抑制免疫反應(yīng)。在病毒感染時，Kupffer細胞通過呈遞抗原激活T淋巴細胞，啟動特異性免疫應(yīng)答。同時，它們也能通過釋放抗炎因子減輕過度炎癥反應(yīng)，避免肝組織損傷。另外，庫普弗細胞表面存在著多種受體，可被多種配體激活，通過產(chǎn)生細胞因子、炎癥介質(zhì)和活性氧等，在多種肝細胞損傷的發(fā)病過程中起到重要的作用。

圖片來源：IPHASE 猴Kupffer細胞

總之，Kupffer細胞（Kupffer Cells, KCs）在清除血液中的有害物質(zhì)、調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)及維持肝臟微環(huán)境穩(wěn)定方面發(fā)揮重要作用，并與多種肝臟疾病的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。利用Kupffer細胞構(gòu)建肝臟疾病相關(guān)3D細胞模型和類器官，可為肝臟疾病機制和藥物篩選提供更加高效的體外研究模型，更可用于肝靶向（Liver-Targeted）或肝遞送（Liver Delivery）藥物的優(yōu)化研究工具之一！

03    猴肝免疫細胞 Monkey Liver Immune cells

猴肝臟不僅是代謝和解毒的核心器官，同時也是重要的免疫調(diào)節(jié)中心，富含多種淋巴細胞亞群，包括B細胞、T細胞、自然殺傷細胞（NK細胞）和自然殺傷T細胞（NKT細胞）。這些細胞在肝臟獨特的免疫微環(huán)境中相互作用，共同維持免疫監(jiān)視、抗感染、炎癥調(diào)控和免疫耐受的平衡。肝臟作為一個“免疫器官"的特殊性在于其直接接收來自腸道門靜脈的血液，使其持續(xù)暴露于食物抗原、微生物產(chǎn)物和潛在病原體，因此需要精細的免疫調(diào)控機制來區(qū)分無害物質(zhì)和有害威脅。

在靈長類（如猴）肝臟中，淋巴細胞的組成和功能與外周免疫系統(tǒng)存在顯著差異。例如，肝臟富含先天免疫細胞（如NK和NKT細胞），而傳統(tǒng)適應(yīng)性免疫細胞（如B細胞和常規(guī)T細胞）的比例相對較低。這種獨特的細胞分布使肝臟能夠快速響應(yīng)血源性感染（如病毒、細菌或寄生蟲），同時避免對無害抗原（如食物蛋白或共生菌成分）產(chǎn)生過度炎癥反應(yīng)。

NK細胞

【特征】

①猴肝臟中NK細胞比例較高（約15-30%），尤其在肝竇中富集。

②其表型為CD56+（猴可能為CD16+）、NKG2D+、NKp46+，部分為組織駐留型（CD69+）。

【功能】

①直接殺傷：通過穿孔素/顆粒酶或死亡受體（如FasL）殺死腫瘤或病毒感染的肝細胞。

②分泌IFN-γ、TNF-α等細胞因子；

③與肝竇內(nèi)皮細胞相互作用，參與免疫調(diào)節(jié)。

NKT細胞

【特征】

①兼具T細胞（TCRαβ+）和NK細胞（如NK1.1+）標(biāo)志，識別CD1d提呈的脂類抗原；

②猴肝中NKT細胞比例顯著高于外周血（約5-20%）；

③分為兩個亞型：

Ⅰ型（經(jīng)典NKT）：表達半恒定的TCR（Vα24-Jα18），快速分泌Th1/Th2細胞因子；

Ⅱ型（非經(jīng)典NKT）：TCR多樣性更豐富，功能尚不明確。

【功能】

①雙向調(diào)節(jié)：可促炎（IFN-γ）或抗炎（IL-4、IL-10），依賴微環(huán)境信號；

②肝損傷與修復(fù)：在藥物性肝損傷（如猴模型中的對乙酰氨基酚毒性）中起關(guān)鍵作用。

T細胞

【特征】

分為三個亞型：

CD4+ T細胞（輔助性T細胞）：分泌IFN-γ、IL-4等細胞因子，調(diào)控B細胞和CD8+ T細胞應(yīng)答；在肝纖維化中可能促進炎癥（Th1）或抑制免疫（Th2）。

CD8+ T細胞（細胞毒性T細胞）:占肝臟T細胞的主要部分（猴肝中可達50-70%），具有直接殺傷病毒感染肝細胞的能力；常表達活化標(biāo)志（如CD69）和記憶標(biāo)志（CD44）。

調(diào)節(jié)性T細胞（Treg）：表達FoxP3，抑制過度免疫反應(yīng)，維持肝臟免疫耐受。

【功能】

①清除病毒感染的肝細胞（如猴免疫缺陷病毒SIV）；

②在肝移植免疫中參與排斥或耐受。

B細胞

【特征】

①猴肝臟中B細胞比例較低（約占肝臟淋巴細胞的5-15%），主要分布在門靜脈周圍和肝竇；

②表達CD19、CD20和表面免疫球蛋白（sIg），部分為記憶B細胞（CD27+）。

【功能】

①抗體產(chǎn)生：在病原體（如肝炎病毒）刺激下分化為漿細胞，分泌特異性抗體；

②抗原呈遞：通過MHC-II分子激活T細胞；

③免疫調(diào)節(jié)：分泌細胞因子（如IL-10）調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)。

④在慢性肝?。ㄈ绾顱病毒感染）中可能參與自身抗體產(chǎn)生或免疫耐受。

總之，猴肝臟的免疫研究對理解人類肝?。ㄈ绮《拘愿窝?、肝纖維化、肝癌）的發(fā)病機制具有重要意義，也為器官-移-植和自身免疫病研究提供了獨特視角。未來，通過單細胞測序、多色流式等技術(shù)深入解析猴肝臟淋巴細胞的異質(zhì)性，將有助于揭示新的免疫治療靶點，推動肝病精準醫(yī)學(xué)的發(fā)展。

04    猴肝竇內(nèi)皮細胞 Monkey Liver Sinusoidal Endothelial Cells, LSECs

肝竇內(nèi)皮細胞（Liver Sinusoidal Endothelial Cells, LSECs）是肝臟中一種特殊的內(nèi)皮細胞，位于肝竇（肝血竇）內(nèi)壁，構(gòu)成肝竇的血管內(nèi)襯，占據(jù)了肝非實質(zhì)細胞的70%。 LSECs富含窗孔以及缺乏內(nèi)皮下完整基底膜使之成為哺乳動物體內(nèi)最-具有滲透性的內(nèi)皮細胞，通過允許血漿中小分子自由通過和阻擋較大顆粒的形式來參與物質(zhì)交換和代謝調(diào)節(jié)。與此同時，LSECs表面表達豐富的受體如SR-BI,和Stabilin-1/2等，可高效吞噬血液中的大分子廢物、病原體、衰老蛋白甚至是納米顆粒，因此，LSECs是體內(nèi)重要的“血液凈化器"。

圖片來源：網(wǎng)絡(luò)

LSECs是重要的藥物代謝參與者，尤其是首過代謝的重要成員。它們富含多種清除受體（如清道夫受體、甘露糖受體、Fc受體等），能主動攝取并降解血液中的多種內(nèi)源性物質(zhì)（如透明質(zhì)酸、變性蛋白）和外源性物質(zhì)，包括某些藥物分子、納米載體或大分子生物制劑（如寡核苷酸、抗體藥物偶聯(lián)物片段）。這種清除作用可能影響藥物的全身暴露量、藥代動力學(xué)特性和藥效。同時，LSECs表達多種藥物代謝酶（如CYP450同工酶，雖然活性通常低于肝細胞）和藥物轉(zhuǎn)運體，能進行部分I相和II相代謝反應(yīng)，直接參與某些藥物的轉(zhuǎn)化或失活過程，補充肝細胞的代謝功能。理解LSECs對特定藥物的攝取和代謝能力對于預(yù)測藥物體內(nèi)命運至關(guān)重要。總之，LSECs主要通過發(fā)揮抗炎、內(nèi)吞、分泌促血管生成信號分子和維持HSCs表型等作用, 參與調(diào)控非酒精性脂肪肝病(nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD)、酒精性脂肪肝(alcoholic fatty liver, AFL)、肝細胞性肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)、肝再生、肝纖維化等肝臟病理過程。

最后，在藥物安全性評價中，LSECs是肝毒性早期預(yù)警的關(guān)鍵哨兵。它們對藥物或其中間代謝產(chǎn)物誘導(dǎo)的損傷極為敏感。許多藥物（如對乙酰氨基酚過量、某些化療藥、生物制劑）或其活性代謝物可直接損傷LSECs或通過引起氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)導(dǎo)致其功能障礙（窗孔收縮/消失，即“毛細血管化"）或死亡。LSECs損傷會破壞肝竇屏障完整性，導(dǎo)致肝竇充血、微循環(huán)障礙，并促進炎癥細胞浸潤和肝星狀細胞活化，最終可能發(fā)展為肝竇阻塞綜合征（SOS/VOD）或其他形式的肝損傷。因此，在臨床前研究（尤其是使用非人靈長類模型時）中，密切評估藥物對猴L(fēng)SECs的結(jié)構(gòu)和功能影響，是預(yù)測人類潛在肝竇毒性的重要環(huán)節(jié)，有助于早期淘汰高風(fēng)險候選藥物或設(shè)計規(guī)避策略。

05    猴肝內(nèi)膽管上皮細胞 Monkey Intrahepatic biliary epithelial cells,IBEpiCs

肝內(nèi)膽管上皮細胞（Intrahepatic Biliary Epithelial Cells,IBEpiCs)占肝臟細胞總數(shù)的3%～5%，是構(gòu)成肝內(nèi)膽管系統(tǒng)的主要功能細胞，分布于肝內(nèi)二級膽管及其分支以上的膽管系統(tǒng)，主要覆蓋肝左葉和右葉的膽管分叉處。IBEpiCs呈立方或柱狀，具有頂膜和基底外側(cè)膜，從其頂膜延伸出來的微絨毛和初級纖毛具有特征性，微絨毛使細胞表面積增加了5倍，初級纖毛則能感受機械、化學(xué)刺激以及滲透壓的改變，是維持其細胞穩(wěn)態(tài)的關(guān)鍵。IBEpiCs的肌動蛋白細胞骨架具有助于維持膜張力、穩(wěn)定細胞形態(tài)和調(diào)節(jié)囊泡運輸?shù)墓δ堋?/span>

IBEpiCs具有分泌與吸收、炎癥修復(fù)和免疫屏障等作用：

【分泌與吸收】

IBEpiCs的頂膜和基底外側(cè)膜存在不同的離子載體和通道，分泌和吸收各種物質(zhì)。IBEpiCs主要分泌物之一是膽汁，占膽汁總排出量的40%，其在膽汁生成中至關(guān)重要。此外，IBEpiCs還可以吸收膽汁酸、葡萄糖、氨基酸、水和各種離子，通過相關(guān)的轉(zhuǎn)運蛋白和通道蛋白實現(xiàn)雙向運輸。

【炎癥與修復(fù)】

IBEpiCs參與肝臟損傷引起的炎癥和修復(fù)反應(yīng)。IBEpiCs經(jīng)各種損傷激活后可分泌多種細胞因子和趨化因子，包括轉(zhuǎn)化生長因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白介素-6（interleukin-6，IL-6）、IL-8、CCL2、血小板源性生長因子-B（platelet derived growth factor-B，PDGF-B）等，這些因子會以自分泌和旁分泌的方式參與炎癥反應(yīng)，致使IBEpiCs增殖、凋亡和衰老。隨著炎癥反應(yīng)加劇，受損膽管周圍瘢痕組織過度沉積，引發(fā)病理性修復(fù)反應(yīng)。

【免疫屏障】

IBEpiCs擁有復(fù)雜的免疫機制，是肝臟免疫調(diào)節(jié)的重要組成部分，IBEpiCs在未被激活狀態(tài)下，分泌包含IgA在內(nèi)的多種抗菌蛋白，具有潛在的抗菌作用和免疫功能。IBEpiCs表達的Toll樣受體（toll-like receptors，TLRs），在識別抗原后會分泌抗菌蛋白、炎癥性細胞因子和黏附分子。同時，IBEpiCs作為抗原呈遞細胞還可表達人類白細胞抗原（human leukocyte antigen，HLA），促進免疫反應(yīng)的定位。當(dāng)IBEpiCs被各種損傷激活后，會分泌TNF-α、干擾素-γ（Interferon-γ，IFN-γ）、IL-6、IL-8、CCL2、CXCL16、HLA等參與免疫調(diào)控。

目前已發(fā)現(xiàn)肝內(nèi)膽管上皮細胞在膽汁淤積性肝?。╟holestatic liver diseases，CLD）、肝纖維化( Hepatic fibrosis，HF) 和肝內(nèi)膽管癌（intrahepatic cholangiocarcinoma，ICC）等肝臟疾病中扮演著關(guān)鍵角色。因此，合適的肝內(nèi)膽管上皮細胞（Intrahepatic biliary epithelial cells,IBEpiCs)模型顯得至關(guān)重要。而猴作為體外模型的“黃金標(biāo)準"，猴肝內(nèi)膽管上皮細胞（Monkey Intrahepatic biliary epithelial cells,IBEpiCs)即是關(guān)鍵的“黃金模型"。

06    IPHASE 產(chǎn)品

綜上所述，非實質(zhì)細胞（Non-Parenchymal Cells, NPCs）雖“默默無聞"，卻是肝臟健康的核心調(diào)控者。而猴的肝臟結(jié)構(gòu)與人類高度相似，更是研究肝臟疾病的黃金模型。因此，猴肝非實質(zhì)細胞實現(xiàn)了從免疫防御（T、NK、NKT及Kupffer細胞）到纖維化（Hepatic stellate cells，HSCs），從代謝（Liver Sinusoidal Endothelial Cells, LSECs）到再生（Intrahepatic biliary epithelial cells,IBEpiCs）的全套體外研究模型，在體外共同構(gòu)成了肝臟的“隱形守護者網(wǎng)絡(luò)"。

鑒于此，IPHASE作為體外研究生物試劑引-領(lǐng)者，為滿足市場對高質(zhì)量猴非實質(zhì)細胞模型的迫切需求，現(xiàn)已研發(fā)、生產(chǎn)出具有高活性、高純度且批次間差異小的猴肝星狀細胞、猴肝星狀細胞(Monkey Hepatic stellate cells，HSCs)、猴庫普弗細胞（Monkey Kupffer cells，KCs）、部分猴肝免疫細胞（Monkey Liver Immune cells），并正同步研發(fā)猴肝竇內(nèi)皮細胞（Monkey Liver Sinusoidal Endothelial Cells）和猴肝內(nèi)膽管上皮細胞（Monkey Liver Sinusoidal Endothelial Cells, LSECs）。猴非實質(zhì)細胞是連接基礎(chǔ)科學(xué)與臨床轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵橋梁，更是突破肝病治療困境的轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)樞紐，適用于肝臟纖維化機制研究、藥物靶點篩選、細胞互作分析及再生醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域的探索。

IPHASE生產(chǎn)產(chǎn)品均具有以下優(yōu)勢：

合規(guī)性 生產(chǎn)產(chǎn)品的組織均由正規(guī)渠道獲得，來源清晰。

安全性 生產(chǎn)組織均經(jīng)過病原檢測，保證產(chǎn)品質(zhì)量安全。

高質(zhì)量 生產(chǎn)產(chǎn)品均經(jīng)過嚴格的內(nèi)部質(zhì)控，且同批次數(shù)量多，批次間差異性小。

可定制 可根據(jù)客戶特殊需求，提供特殊種屬肝組織細胞的定制服務(wù)。